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细胞培养——细胞传代

细胞在培养皿中生长一定的时间后,达到对数生长期,被分开接种到新的培养器皿中继续生长或做实验。

细胞培养流程主要分为:细胞复苏、细胞传代、细胞冻存

上一期已经向大家介绍了细胞复苏的相关内容,这一期我们一起来了解一下关于细胞传代的相关内容。

一、什么是细胞传代?

细胞在培养皿中生长一定的时间后,达到对数生长期,被分开接种到新的培养器皿中继续生长或做实验。

二、细胞传代的具体操作步骤

贴 壁 细 胞

01 从培养箱取出细胞培养瓶(一般选择处于对数期的细胞),转移到超净台。弃去原有培养液,用1-2mL PBS缓冲液洗涤1次(注意从侧壁加入,以免冲掉细胞),弃去PBS缓冲液。

02 向培养瓶中加入1mL胰酶,消化,将加入胰酶的细胞培养瓶转移到倒置显微镜下观察细胞消化情况,当细胞变圆且大量脱落时,转移到超净台。

03 加入2mL完全培养基,终止消化。用移液器充分缓慢吹打,使细胞能够完全脱落。然后将细胞悬液转移至15mL离心管中,1000rpm/min离心5分钟,转移进超净台,打开盖子,弃去上清。

04 用1mL完全培养基重悬细胞团块,制备细胞悬液,然后将细胞悬液分装进2个(或多个)含有4mL完全培养基的细胞培养瓶中,盖上瓶盖混匀。

05 将细胞培养瓶放入37℃、5%CO2培养箱中继续培养。

悬 浮 细 胞

01 从培养箱取出细胞培养瓶(一般选择处于对数期的细胞),转移到超净台。用移液器将细胞培养瓶中的细胞液转移至15mL离心管中,1000rpm/min离心5分钟,转移进超净台,打开盖子,弃去上清。

02 用1mL完全培养基重悬细胞团块,制备细胞悬液,然后将细胞悬液分装进2个(或多个)含有4mL完全培养基的细胞培养瓶中,盖上瓶盖混匀。

03 将细胞培养瓶放入37℃、5%CO2培养箱中继续培养。

注意事项

1. 实验过程中每次将物品拿进超净台中前,一定要向其喷洒75%酒精消毒,或用酒精棉球擦拭,防止污染,实验全程无菌操作。

2. 适度消化:细胞消化的时间主要取决于消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等,消化过程中应该注意培养细胞形态的变化,一旦胞质回缩,连接变松散,或有成片浮起的迹象就要加入含有血清的培养基立即终止消化。

发布于:2022-06-19



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